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外泌体蛋白浓度问题

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发表于 2016-12-8 21:32:31 | 显示全部楼层 |阅读模式
用超速离心法提取血清中外泌体后,pbs重悬。在测蛋白和蛋白变性的过程中需要加入裂解液吗?目前我自己一直未加裂解液,向加过裂解液的同志学习一下经验.
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发表于 2016-12-9 09:52:59 | 显示全部楼层
如果准备做western,弃去上清后,我直接用加入RIPA裂解液,冰上裂解10分钟后,BCA法测浓度。
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 楼主| 发表于 2016-12-9 11:04:23 | 显示全部楼层
baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-9 09:52
如果准备做western,弃去上清后,我直接用加入RIPA裂解液,冰上裂解10分钟后,BCA法测浓度。 ...

可是还涉及到外泌体保存问题。
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发表于 2016-12-9 22:46:28 | 显示全部楼层
I got. 如果后续实验需要完整外泌体,我们实验室用NTA测浓度,还有人PBS重悬后取一点直接BCA法测蛋白浓度。
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发表于 2016-12-15 22:23:35 | 显示全部楼层
谢谢楼主
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发表于 2016-12-15 22:29:26 | 显示全部楼层
学习一下,楼主,谢谢
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发表于 2018-1-9 12:10:20 | 显示全部楼层
baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-9 09:52
如果准备做western,弃去上清后,我直接用加入RIPA裂解液,冰上裂解10分钟后,BCA法测浓度。 ...

亲,你的浓度测来是多少呀,用的什么样本,量是多少呀
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发表于 2018-1-9 23:08:37 | 显示全部楼层
xiaoruan 发表于 2018-1-9 12:10
亲,你的浓度测来是多少呀,用的什么样本,量是多少呀

大鼠原代胶质细胞来源的外泌体,100ml无血清培养基,24小时后超离收集外泌体。50微升RIPA重悬,BCA定蛋白量,浓度一般0.4-0.5微克/微升。Western,load10微克蛋白。
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发表于 2018-1-12 14:45:27 | 显示全部楼层
baishixiaoyaozi 发表于 2018-1-9 23:08
大鼠原代胶质细胞来源的外泌体,100ml无血清培养基,24小时后超离收集外泌体。50微升RIPA重悬,BCA定蛋白 ...

请问你做的marker是? CD63好做么?
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发表于 2018-1-13 00:03:50 | 显示全部楼层
ronaldchen 发表于 2018-1-12 14:45
请问你做的marker是? CD63好做么?

CD63, flotilin, tsg101
CD63用的是Santa Cruz的抗体,还可以。Smear大小在50-70Kda之间
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