PEG聚沉+超速离心试用报告：Sci Rep文章技术重复

Mars · 发表于 2016-5-24 12:40:41

hzangs 发表于 2016-4-27 17:46
PEG+超速离心清洗这个方法还可以。
如果你用一个十几毫升或者几十毫升PBS的体系进行清洗这一步的话，结 ...

这一步是不是文献里最后100000g超高速离心前用PBS洗啊？你用多少啊？文献里说的是1ml

Mars · 发表于 2016-5-25 13:37:16

hzangs 发表于 2016-5-24 17:57
高压灭菌，然后 0.22um的滤器再过滤除去PBS里的颗粒。

买现成的PBS可以吗

Mars · 发表于 2016-5-31 19:56:30

hzangs 发表于 2016-5-27 09:55
最后一步的目的是去除杂蛋白。沉淀法容易带杂蛋白下来，最后用PBS洗一下 ...

问一下，你在用100000g超速离心前要把原先细胞上清和PEG混合液先浓缩一下吗

Mars · 发表于 2016-6-1 09:33:17

hzangs 发表于 2016-6-1 08:19
是将Peg沉淀下来的东西 PBS重悬，然后超离

是不是文献里说的3214g，1h，4℃后的沉淀然后PBS重悬超离

Mars · 发表于 2016-6-1 16:59:33

hzangs 发表于 2016-6-1 10:34
嗯嗯。是的

再问一下，文献里的shaking up to 30min怎么理解，你这样做了吗，对蛋白有影响吗

Mars · 发表于 2016-6-1 22:55:52

hzangs 发表于 2016-6-1 10:34
嗯嗯。是的

楼主问一下，最后一步超离，你离心几次，每次多久，谢谢

Mars · 发表于 2016-6-3 16:33:18

hzangs 发表于 2016-6-2 17:00
一次。 70min

最后超离后用多少PBS重悬呢？

Mars · 发表于 2016-6-7 10:01:09

hzangs 发表于 2016-6-5 20:46
这要看你起始的培液体积以及你的使用的细胞系是否是外泌体释放量比较高的细胞系。 ...

楼主最近用了50ml上清提取外泌体PEG6000法，超离前隐约看到点，超离后完全看不到啊，这个怎么整

Mars · 发表于 2016-6-7 10:24:36

hzangs 发表于 2016-6-7 10:06
这个问题描述有点太模糊了……
但是你可以尝试在超离前取一部分样品跑个WB 看看有没有exosomes的mark ...

好的，就是我正常离心超离前有一个3000多g的离心1h,这个时候还能勉强看到，然后超离啥也看不多

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