PEG聚沉+超速离心 试用报告 ：Sci Rep文章技术重复

hzangs

xiaojinyuhen 发表于 2017-3-31 14:16
不是唉，就是按本文中您的方法，PEG+超离，提取了大约100ml的培液才保证了上样量，每孔20微克蛋白，但是 ...

那应该是实验过程中出错了。    这个方法其实和沉淀试剂盒一样。     
你下次尝试  PEG  设置一组WB    然后PEG+超离 设置一组WB   cell裂解一组。  这样看看    能知道是不是你在超离清洗的时候洗丢了

hzangs

范范 发表于 2017-4-30 21:07
请问楼主最后一步不超离效果是不是和试剂盒效果是一样的，如果不超离做出来的WB和电镜结果可以用吗，谢谢啦 ...

是的。 至于能不能用，要看你图片质量的。

hzangs

丫丫 发表于 2017-5-2 17:17
楼主，请问提过尿液中的外泌体吗？我用超离做的，最后管底看不到沉淀。。。 ...

没有这方面的经验。恕我无能为力

hzangs

五月灼蓁 发表于 2017-5-9 16:13
请问下楼主，一般用多少培养液提取外泌体

一般80ml左右

hzangs

只是完美 发表于 2017-7-15 18:37
我想问一下，4度静置一晚上后，第二天离心前，需要充分混匀再离心吗？

颠倒混匀几次即可

hzangs

我是外泌体 发表于 2017-8-12 11:49
你好 ，你这是做到细胞培养液实验，想问一下您用过血清做过实验吗

没有尝试过

hzangs

ij1211 发表于 2017-9-4 13:45
请问楼主你超离过后能看到离心管底部有沉淀吗？我用PEG沉淀后10000g离心时是可以看到底部沉淀的，但超离110 ...

起始样品太少，或者在超离过程中弄丢了

hzangs

liwx 发表于 2018-3-28 01:15
如果是10000g过后，用10000g的转速PBS洗涤，这种方法是否也可以去除杂蛋白？

只能去除部分杂蛋白。  目前没有任何办法完全去除外泌体样品中的杂蛋白。只能是尽可能减少

hzangs

huangsheng 发表于 2018-12-19 11:17
版主，自己超离的话，一般多长时间，之前看您的专栏，是需要14-16个小时，我这边仪器原因，只能离4个小时 ...

4h 应该是不太可行的。。。

hzangs

桃花灼灼 发表于 2019-1-14 09:12
本人刚开始做外泌体，请问一下楼里的大神们，细胞在6孔板里长了五天了，第三天的时候密度已经有90%了，还能 ...

6孔板收集培液还想做外泌体 o(╯□╰)o     大家一般是10cm 盘子   五六盘起