PEG聚沉+超速离心 试用报告 ：Sci Rep文章技术重复

hzangs

xiaojinyuhen 发表于 2017-3-8 17:02
谢谢版主大大，请问你跑WB用BCA定量细胞和外泌体定量成一样的吗？因为没看到您的actin或者tublin。而且PEG ...

我的图是定量之后 上相同量的蛋白 跑WB的

hzangs

dangerous517 发表于 2017-3-21 22:12
版主好人，我刚接触外泌体，想请问您，如果我想让提取出的外泌体共培养细胞该怎么操作？   是把pbs重悬后的 ...

提取出的外泌体  PBS重悬，加到共培养的细胞上清中即可

hzangs

arsenal-xie 发表于 2017-3-21 23:30
请问你是用的多少X的loading buffer，因为上清提取的蛋白浓度就不高。

1x

hzangs

dangerous517 发表于 2017-3-23 12:27
请问版主，提取出外泌体用pbs重悬后不加裂解液裂解能使外泌体中的蛋白释放出来吗？还有就是不需要加蛋白酶 ...

不加裂解液的话  直接用loading 煮一煮  也可以。  loading里面有破膜剂    只是用lysis 裂一下 可能效果会更好

hzangs

dangerous517 发表于 2017-3-23 14:59
那蛋白酶抑制剂也不加？

没有加

hzangs

dangerous517 发表于 2017-3-24 12:01
版主好人，请问如果我想用外泌体去处理细胞，将细胞种入六孔板后是直接加入含有外泌体悬液的培养基培养还是 ...

一般细胞贴壁后  第二天加入外泌体

hzangs

xiaojinyuhen 发表于 2017-3-27 10:34
版主能问下你这个型号抗体 CD63的分子量吗，有的文献是在55左右，有的在33左右，很迷茫啊 谢谢啦 ...

cd63 有糖基化修饰   不同细胞大小不同

hzangs

dangerous517 发表于 2017-3-27 20:17
版主好人，我是从上清培养基中提外泌体，请问是完全培养基培养48小时后换成无exo培养基继续培养48小时后收 ...

两种方法都可以。 直接用无外泌体的含血清培液培养收取   是比较常见的方法。

hzangs

dangerous517 发表于 2017-3-27 21:02
版主好人，请问我想用提取出来的exo处理细胞，那么是将exo混入普通完全培养基去共培养细胞，还是把exo混入 ...

这个无所谓的。都可以。  只要做好严格的对照即可。

hzangs

xiaojinyuhen 发表于 2017-3-31 11:36
版主您好，请问我WB跑的 细胞裂解蛋白和EXO的CD63是齐的一条带，已经BCA定量到相同蛋白上样量，请问这种情 ...

沉淀试剂盒提取的外泌体吧？