PEG聚沉+超速离心 试用报告 ：Sci Rep文章技术重复

pytruth

hzangs 发表于 2016-5-31 17:39
细胞释放外泌体的量多不多 只能通过自己做实验逐渐尝试。  一般分泌量中等的细胞系使用60ml上清提外泌体 ...

那就是说超速离心法分离出的外泌体是最多的了？如果用60ml的上清液提取出的外泌体够做些什么呢？WB或者电镜够吗？另外就是还想问问楼主，饥饿培养（培养基中不加入血清培养）会不会刺激细胞分泌更多外泌体呢？谢谢楼主

Mars

hzangs 发表于 2016-6-1 10:34
嗯嗯。是的

再问一下，文献里的shaking up to 30min怎么理解，你这样做了吗，对蛋白有影响吗

Mars

hzangs 发表于 2016-6-1 10:34
嗯嗯。是的

楼主问一下，最后一步超离，你离心几次，每次多久，谢谢

hzangs

Mars 发表于 2016-6-1 22:55
楼主问一下，最后一步超离，你离心几次，每次多久，谢谢

一次。 70min

Mars

hzangs 发表于 2016-6-2 17:00
一次。 70min

最后超离后用多少PBS重悬呢？

gracexiguan

hzangs 发表于 2016-4-26 14:25
这是用的细胞上清液。 没有拍电镜

请问用了多少细胞上清啊？谢谢

wangjkm

楼主，我想咨询一下，外泌体具体WB怎么跑？提取出来后用少量PBS重悬后，需要超声和BSA测浓度吗？还是直接加lording buffer和水上样呢？还是个新手，请多多见谅。

hzangs

Mars 发表于 2016-6-3 16:33
最后超离后用多少PBS重悬呢？

1ml-30ml 都可以。  条件允许的话 就用大一点的体积

hzangs

pytruth 发表于 2016-6-1 15:21
那就是说超速离心法分离出的外泌体是最多的了？如果用60ml的上清液提取出的外泌体够做些什么呢？WB或者电 ...

足够做WB 和 电镜了。   至于 饥饿培养是不是增加外泌体释放， 这个我没有见到类似的报道。

hzangs

gracexiguan 发表于 2016-6-4 20:04
请问用了多少细胞上清啊？谢谢

不同细胞系产量不一样的。 这是一个外泌体产量很高的细胞系   用了几毫升培液分到的。