PEG聚沉+超速离心 试用报告 ：Sci Rep文章技术重复

hzangs

xiaojinyuhen 发表于 2017-3-27 10:34
版主能问下你这个型号抗体 CD63的分子量吗，有的文献是在55左右，有的在33左右，很迷茫啊 谢谢啦 ...

cd63 有糖基化修饰   不同细胞大小不同

dangerous517

版主好人，我是从上清培养基中提外泌体，请问是完全培养基培养48小时后换成无exo培养基继续培养48小时后收集上清培养基，还是直接用无exo培养基直接培养48小时后收集上清培养基？

hzangs

dangerous517 发表于 2017-3-27 20:17
版主好人，我是从上清培养基中提外泌体，请问是完全培养基培养48小时后换成无exo培养基继续培养48小时后收 ...

两种方法都可以。 直接用无外泌体的含血清培液培养收取   是比较常见的方法。

dangerous517

版主好人，请问我想用提取出来的exo处理细胞，那么是将exo混入普通完全培养基去共培养细胞，还是把exo混入无外泌体培养基去处理细胞？好人平安

hzangs

dangerous517 发表于 2017-3-27 21:02
版主好人，请问我想用提取出来的exo处理细胞，那么是将exo混入普通完全培养基去共培养细胞，还是把exo混入 ...

这个无所谓的。都可以。  只要做好严格的对照即可。

xiaojinyuhen

版主您好，请问我WB跑的 细胞裂解蛋白和EXO的CD63是齐的一条带，已经BCA定量到相同蛋白上样量，请问这种情况正常吗，为什么细胞中也能跑出和EXO一样的CD63

hzangs

xiaojinyuhen 发表于 2017-3-31 11:36
版主您好，请问我WB跑的 细胞裂解蛋白和EXO的CD63是齐的一条带，已经BCA定量到相同蛋白上样量，请问这种情 ...

沉淀试剂盒提取的外泌体吧？

xiaojinyuhen

hzangs 发表于 2017-3-31 13:55
沉淀试剂盒提取的外泌体吧？

不是唉，就是按本文中您的方法，PEG+超离，提取了大约100ml的培液才保证了上样量，每孔20微克蛋白，但是我跑出来CD63的WB，细胞和外泌体的样本都是齐的，没有出现外泌体高于细胞的情况

hzangs

xiaojinyuhen 发表于 2017-3-31 14:16
不是唉，就是按本文中您的方法，PEG+超离，提取了大约100ml的培液才保证了上样量，每孔20微克蛋白，但是 ...

那应该是实验过程中出错了。    这个方法其实和沉淀试剂盒一样。     
你下次尝试  PEG  设置一组WB    然后PEG+超离 设置一组WB   cell裂解一组。  这样看看    能知道是不是你在超离清洗的时候洗丢了

william

留存，谢谢！