PEG聚沉+超速离心试用报告：Sci Rep文章技术重复

神外勇哥哥 · 发表于 2016-7-28 21:17:33

楼主用了多少毫升上清液啊感觉沉淀出来的好明显啊还有想问下跑Western时候外泌体裂解了嘛加了多少裂解液？

hzangs · 发表于 2016-7-28 21:30:02

神外勇哥哥发表于 2016-7-28 21:17
楼主用了多少毫升上清液啊感觉沉淀出来的好明显啊还有想问下跑Western时候外泌体裂解了嘛加了多少裂解液 ...

我用的巨噬细胞上清大概10ml 巨噬细胞囊泡释放量很大的。

没有裂解，直接loading 煮煮就跑了

林剑邦 · 发表于 2016-8-3 21:05:15

感谢楼主！实验室有现成的PEG 8000，请问可以用PEG 8000按比例稀释成6000吗？还有一个问题，PEG方法对杂蛋白含量多的样品适用吗，应该怎么处理呢？

hzangs · 发表于 2016-8-4 09:57:00

林剑邦发表于 2016-8-3 21:05
感谢楼主！实验室有现成的PEG 8000，请问可以用PEG 8000按比例稀释成6000吗？还有一个问题，PEG方法对杂蛋 ...

6000和8000指的是PEG的分子量，这两者是不能相互换算的，建议你买一点。直接可以从生工生物买国产的，我当时买的国产的，1斤才几十块钱 O(∩_∩)O哈哈~。另外这个方法对杂蛋白含量高的样品不太适用，最好用PEG+超离的方法尝试。

林剑邦 · 发表于 2016-8-4 23:38:58

谢谢楼主回复！！我最近看到一篇用PEG的文章，它提出配PEG不加Nacl提取效果会更好呢，而且它是用的PEG 10000，楼主有试过吗？。Weng Y, Sui Z, Shan Y, Hu Y, Chen Y, Zhang L, Zhang Y. (2016) Effective isolation of exosomes with polyethylene glycol from cell culture supernatant for in-depth proteome profiling.

hzangs · 发表于 2016-8-5 00:34:31

林剑邦发表于 2016-8-4 23:38
谢谢楼主回复！！我最近看到一篇用PEG的文章，它提出配PEG不加Nacl提取效果会更好呢，而且它是用的PEG 1000 ...

这个我没有尝试。

hzangs · 发表于 2016-8-5 00:34:35

林剑邦发表于 2016-8-4 23:38
谢谢楼主回复！！我最近看到一篇用PEG的文章，它提出配PEG不加Nacl提取效果会更好呢，而且它是用的PEG 1000 ...

这个我没有尝试。

sonja_forever · 发表于 2016-9-9 13:04:10

yayinano 发表于 2016-5-4 15:23
谢谢楼主，我在具体看下，血清的，文章里面也没有很具体的描述，头疼中，还有一个技术问题想问下群主，exos ...

U6试一下行不行，还可以用外参的，通过加入外源性线虫miR-39实现

sonja_forever · 发表于 2016-9-9 14:22:14

林剑邦发表于 2016-8-4 23:38
谢谢楼主回复！！我最近看到一篇用PEG的文章，它提出配PEG不加Nacl提取效果会更好呢，而且它是用的PEG 1000 ...

我也看到了，正在尝试，请问你用这个方法试过了吗

泌外糙汉 · 发表于 2016-9-28 16:55:09

hzangs 发表于 2016-5-4 14:52
你还是需要参考一下原文的。只是我根据之前的一篇文献提供的方法做的。你要读一下原文看看他们是怎 ...

请问一下，是根据哪篇文献

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