超离提取的exosome WB鉴定

王帅帅

无论用什么方法，获得的EXO的量的多少是很重要的 ，推荐做好用试剂盒，你用超速离心法查宿分离的话，不仅浪费时间，而且也浪费金钱，一个超高速离心管的价钱是多少？贝克曼的我不知道，但是日立的大概算下来一个50快，而且离心管的使用是由寿命的，在一个就是你用差速离心得用多少上清液，多少血清，培养基，这些算下来不如一个试剂盒合算。











ps：我是hzangs， 在这里只好通过编辑楼层来回复层主的言论了。    这里随便更改了层主的帖子，还望见谅。
目前看，很多PEG-base沉淀分离法试剂盒在分离外泌体方面存在非常大的缺陷，一个明显的表征就是 沉淀下来的所谓的“外泌体” 蛋白量非常大，一般比超离分离法高出1个甚至几个数量级。 这样的结果很可能是由于在沉淀的时候 大量的杂蛋白被沉淀下来了。 这些所谓的外泌体样品中 可能外泌体所占的比例 微乎其微。目前只有少数一两款是其他原理的kit，主流的一些试剂盒包括life、SBI等等大部分是PEG-base的。 使用PEG-base的沉淀试剂盒进行试验，在投paper的时候很容易受到reviewer的质疑，论坛里已经有朋友遇到这样的问题了。 所以在这里给大家提个醒。 超离是目前的金标准，这个毋庸置疑，有时间有条件的研究者 还是老老实实的考虑使用超速离心吧，没条件没时间的 可以考虑尝试一下其他的方法。千万不要图一时的省事而带来后期的隐患

王帅帅

AB的抗体我问了，好像CD63没有现货，所以我选用了santa的cd63抗体，Alix选择的就是santa的抗体，做出来还不错，但是cd63现在还在做，个人觉得CD63应该好做，我用差速离心的方法提取的EXO，选用博奥森的cd63抗体都能做出来，只不过为了使结果更有说服力，选用了santa的抗体。

王帅帅

顺便问一下 有没有人做过密度梯度离心呢？我选用的是线性碘克沙醇梯度，目的是通过沉降速率离心分离EXO和病毒，从而研究病毒感染和EXO的关系，但是这个密度梯度好像和不好做，我选用两室梯度杯，梯度混合器，蠕动泵，但是做出来的梯度不理想，不知道有没有用这个方法做过线性梯度的。