超离提取的exosome WB鉴定

hzangs

王帅帅 发表于 2014-12-9 10:38
无论用什么方法，获得的EXO的量的多少是很重要的 ，推荐做好用试剂盒，你用超速离心法查宿分离的话，不仅浪 ...

不要轻易选一些沉淀型的试剂盒。  不然等到reviewer 质疑你的时候  你就傻眼了。。。  你可以问问惜名的遭遇。。。。

zjm337

王帅帅 发表于 2014-12-20 12:27
AB的抗体我问了，好像CD63没有现货，所以我选用了santa的cd63抗体，Alix选择的就是santa的抗体，做出来还不 ...

你好，想问问你做WB的时候每孔加的蛋白总量是多少？

wjy

王帅帅 发表于 2014-12-20 12:31
顺便问一下 有没有人做过密度梯度离心呢？我选用的是线性碘克沙醇梯度，目的是通过沉降速率离心分离EXO和病 ...

你的碘克沙醇的密度梯度结果怎么样？我也是做病毒和exo分离，我采取的是蔗糖垫来分，刚开始做，还不知道结果如何。

wjy

惜名 发表于 2014-12-16 21:02
的确如楼上所说，足够的量很重要。另外，抗体的选择也极为重要，用过几次abcam的，感觉效果极佳。而且abcam ...

看到帖子，求问一下，足够的量是指多少呀？给个建议，你一般都多大的量做一次wb

惜名

wjy 发表于 2016-1-19 14:01
看到帖子，求问一下，足够的量是指多少呀？给个建议，你一般都多大的量做一次wb ...

外泌体蛋白如果纯度很高(譬如用超离提)，3-5ug即可跑一次WB了
我用试剂盒做，一般也是加5-10ug。

wjy

那你在多少细胞上清液中提取的exo那？

wangjoseph

不同的细胞系分泌量不同，
不同的抗体灵敏度也不同，
个人认为别人的结果只能参考，
就本人的几个细胞系和几个抗体来看，
10万个细胞的量就可以了。

binbinpolite

hzangs 发表于 2015-10-20 19:55
不要轻易选一些沉淀型的试剂盒。  不然等到reviewer 质疑你的时候  你就傻眼了。。。  你可以问问惜名的 ...

英雄所见略同啊  看大家的回复 各种关心量  文献中早就报道试剂盒提取的exo不纯   容易受到质疑

君扬2009

学习了  看来还是超速离心最靠谱

sonja_forever

惜名 发表于 2016-1-20 14:16
外泌体蛋白如果纯度很高(譬如用超离提)，3-5ug即可跑一次WB了
我用试剂盒做，一般也是加5-10ug。 ...

请问外泌体上样5-10ug，是不是对应的用来做对照的细胞系也上样5-10ug呀？