PKH67染色

宋梦阳

请问大家知道PKH67怎么染外泌体吗，我看了试剂说明书只有怎么染细胞的，不知道怎么染外泌体，而且Diluent C溶液每次用很多，不敢浪费

宋梦阳

我发现我现在是加了1ul的PKH67与750ul的Diluent C混合，然后EXO与250ul Diluent Ca混合，这样很节省，效果也很好。如果大家想要具体方法的话可以找我要文献，很节省材料效果也很好！

惜名

是时候亮出这篇文献了：Cardiac fibroblast-derived microRNA passenger strand-enriched exosomes mediate cardiomyocyte hypertrophy.



这篇文献用1ml Diluent C稀释，为了省钱，我降低到了0.3-0.5ml；效果一样赞~

wanghx_85

惜名 发表于 2015-12-18 08:44
这个要自己摸索浓度了。我做过6和12孔板，一般加30-100ul都可以获得满意结果。但是，也要根据你获得exo的 ...

惜名版主，根据您的指导，我写了个大概的染色步骤，请您再帮忙指导下看我的理解是否正确：
1、SBI提取外泌体，PBS重选EXO
2、PBS-EXO+1mlDiluent C混匀
3、4ul PKH67 + 1ml Diluent C混匀
4、将步骤3的试剂加入步骤2的液体中，4min
5、2ml BSA 终止染色
6、SBI试剂重提EXO
（注：试剂可按比例适当减量）
问题：整个操作过程是否需要避光？

wjy

wanghx_85 发表于 2016-1-21 11:59
我也不知道哪里出问题了，提了外泌体之后我就用100ulPBS重悬，然后开始PKH67染色，方法是：100ul Diluent C ...

我也做过这个实验，也是sigma的pkh26(红色膜染料)。我是先取1ulpkh26膜染料与100ulexo先孵育增加结合效率，然后加入1ml的 Diluent C，加入200ul1%BSA/PBS（我理解的加入200ul1%BSA/PBS的目的不是的终止反应，是增加连接效率，封闭非特异性的）。然后再体系中加入3ul的PKH26染料室温孵育20min,1h20min,10,0000g超速离心。获得的沉淀用100ul重悬。标记好的exo与细胞共孵育后再共聚焦显微镜下可以看到exo uptake cell

如火如荼

跪求您外泌体PKH67具体的染色步骤，万分感谢！ 839334765@qq.com

z6234206

惜名 发表于 2015-8-22 10:15
是时候亮出这篇文献了：Cardiac fibroblast-derived microRNA passenger strand-enriched exosomes mediate ...

惜名老师，我想请教下。第一：我第二次超离完后，移除上清液，直接用0.5ml的dilution C重悬，然后再加4ul的PKH67避光孵育4分钟，再去超离，这样可以么。  但是就是没有看到绿色的荧光。第二：避光孵育后，因为超离管的要求，要重新添加PBS加满超离管才能去离心，这样会有影响么？  谢谢您的解答

pulongqi@126.co

wjy 发表于 2016-1-21 15:01
我也做过这个实验，也是sigma的pkh26(红色膜染料)。我是先取1ulpkh26膜染料与100ulexo先孵育增加结合效率 ...

染好色的exo可以先-80或-20冷冻暂时储存吗？还是每次用都要现染 多谢！

阿赵

宋梦阳 发表于 2015-10-16 15:37
EXO染色步骤，已发

能不能也发我一份具体的protocol 呀？  万分感谢。13803507528@163.com

阿赵

惜名 发表于 2015-8-22 10:15
是时候亮出这篇文献了：Cardiac fibroblast-derived microRNA passenger strand-enriched exosomes mediate ...

就是说，先将外泌体加入稀释液，然后将燃料加入稀释液。  之后这两者有东西的稀释液混合起来孵育对吗？新手求指教。

guodier

宋梦阳 发表于 2015-10-13 11:19
我发现我现在是加了1ul的PKH67与750ul的Diluent C混合，然后EXO与250ul Diluent Ca混合，这样很节省，效果 ...

你好能麻烦你发一份操作步骤吗，感谢 771644598@qq.com

YML1

1006487795@qq.com跪求一份pkh67染色

z6234206

宋梦阳 发表于 2015-10-13 11:19
我发现我现在是加了1ul的PKH67与750ul的Diluent C混合，然后EXO与250ul Diluent Ca混合，这样很节省，效果 ...

宋大师我也想要一份同求具体实验步骤一份   麻烦您   谢谢  284588951@qq.com

sringma1983

楼主能否麻烦您，发一份染色步骤，刚接触外泌体，请多指。邮箱地址springma2004@126.com