求助！关于凯杰exoEasy Maxi kit提取的exosome的WB

18940258208

hzangs 发表于 2017-5-31 15:37
人胚肺细胞   原代的？还是细胞系？
16ml一般来说确实不多。 如果用400ul洗脱  可能确实浓度很低了。
另 ...

6个不同时间点的exosome标本，看不见泳道全连成一条线了，而且中间还特意留了一个空白孔

18940258208

不好意思，不知道该怎么发图片

18940258208

file:///C:/Documents%20and%20Settings/Administrator/%E6%A1%8C%E9%9D%A2/exosome.gif
不知版主能否看见图片
人胚肺细胞是细胞系的

hzangs

18940258208 发表于 2017-5-31 13:52
回答版主，用的是人胚肺细胞
这是凯杰的说明书
首先要求的量：This protocol is for purifying exosomes  ...

人胚肺细胞   原代的？还是细胞系？
16ml一般来说确实不多。 如果用400ul洗脱  可能确实浓度很低了。
另外 你所描述的 “ 一条线 ”  是什么意思？

hzangs

katuysha 发表于 2017-5-31 11:08
想问下版主，最近在用什么方法提exosomes?

超离，基本一直在超离。

18940258208

katuysha 发表于 2017-5-31 11:07
估计是你的洗脱体系太大了，用100ul左右洗脱可能会好一点。

亲，我用的是凯杰的专门提取盒子，要求是至少400ul

18940258208

hzangs 发表于 2017-5-31 09:22
15ml 上清， 洗脱500ul  取20ul 跑WB。  感觉样品用的少了。  你使用的什么细胞系？ ...

回答版主，用的是人胚肺细胞
这是凯杰的说明书
首先要求的量：This protocol is for purifying exosomes and other EVs from 0.2–4ml of serum or plasma, or
from up to 16 ml of cell culture supernatan
其次，洗脱的量Add 400 μl Buffer XE to the membrane and incubate for 1 min. Centrifuge at 500 x g for
5 min to collect the eluate.
Note: Using less than 400 μl elution buffer will result in incomplete elution. Eluates can
be concentrated e.g., using ultrafiltration. If an ultrafiltration step will be performed,
eluting in 1–2 ml Buffer XE is recommended

katuysha

hzangs 发表于 2017-5-31 09:22
15ml 上清， 洗脱500ul  取20ul 跑WB。  感觉样品用的少了。  你使用的什么细胞系？ ...

想问下版主，最近在用什么方法提exosomes?

katuysha

估计是你的洗脱体系太大了，用100ul左右洗脱可能会好一点。

hzangs

15ml 上清， 洗脱500ul  取20ul 跑WB。  感觉样品用的少了。  你使用的什么细胞系？