做WB前外泌体处理

hzangs

一样要用超速离心才行。  如果你短期做的话  不必-80.  我试过  -20的样品  一周内 跑WB  没问题的

hzangs

yuantingdong 发表于 2016-10-19 10:06
我们这边超速离心不方便，那是不是意味着每次提外泌体之后就要立马提蛋白？谢谢！ ...

一般我会把外泌体样品 重悬在约100ul PBS中，取部分做蛋白定量，然后剩下的直接冻在-20。  用的时候吸取一部分 加6*loading 煮

hzangs

yuantingdong 发表于 2016-10-19 16:51
但是重悬在PBS中后，就必须得超离后才能提蛋白，不能直接处理，问题是我这边不能超离，那是不是就得分开 ...

不用提蛋白。  直接吸几十微升 样品   加loading 煮 即可

hzangs

meiling 发表于 2017-5-29 09:57
您好。我想请教您几个问题：1、如何对细胞培养上清液进行外泌体定量呢？2、如何对外泌体上CD63蛋白定量呢 ...

1、定量方法要么使用蛋白定量如BCA等，要么使用粒子数定量 如NTA等。
2、ELISA

hzangs

YEZENG 发表于 2017-6-21 10:32
是直接加上样缓冲液后直接煮，然后跑weatern blot就行了是吧？我刚开始做，想跑一下标记蛋白，CD63，CD9 ...

嗯嗯

hzangs

布酱 发表于 2018-3-22 09:11
新手一枚，请问hzangs老师，做WB前期处理上样缓冲液一般用什么，金属浴还是水浴？时间是多久？ ...

跟常规的WB 一样操作即可