做WB前外泌体处理

gqq

楼主后来怎么做的？我是外泌体沉淀后加了50ul的PBS重悬，跑WB之前还需特别做什么吗？

猫头鹰爱睡觉觉

我超离的exo，沉淀直接加20ulPBS重悬，冻在-80度一个月后跑WB都可以，直接加5X loading buffer 98度变性5分钟就可以上样了

meiling

hzangs 发表于 2016-10-19 09:48
一样要用超速离心才行。  如果你短期做的话  不必-80.  我试过  -20的样品  一周内 跑WB  没问题的 ...

您好。我想请教您几个问题：1、如何对细胞培养上清液进行外泌体定量呢？2、如何对外泌体上CD63蛋白定量呢？请不吝赐教，多谢！

hzangs

meiling 发表于 2017-5-29 09:57
您好。我想请教您几个问题：1、如何对细胞培养上清液进行外泌体定量呢？2、如何对外泌体上CD63蛋白定量呢 ...

1、定量方法要么使用蛋白定量如BCA等，要么使用粒子数定量 如NTA等。
2、ELISA

meiling

好的 多谢 啦

shuhun

请问用试剂盒提取的外泌体如何做WB

八戒在五湖

hzangs 发表于 2017-5-29 11:17
1、定量方法要么使用蛋白定量如BCA等，要么使用粒子数定量 如NTA等。
2、ELISA ...

请问一下，外泌体重悬于PBS后，直接BCA定量吗，需要加裂解液不

YEZENG

君扬2009 发表于 2016-10-19 10:33
斑竹   我看06年Thery的文章说 从人来源分离的外泌体时，裂解液不加DTT和巯基乙醇。请问你们一般用的是什 ...

你说的06年Thery的文章是什么文章？可以给我也发一份吗？谢谢

YEZENG

hzangs 发表于 2016-10-19 20:57
不用提蛋白。  直接吸几十微升 样品   加loading 煮 即可

是直接加上样缓冲液后直接煮，然后跑weatern blot就行了是吧？我刚开始做，想跑一下标记蛋白，CD63，CD9之类的

hzangs

YEZENG 发表于 2017-6-21 10:32
是直接加上样缓冲液后直接煮，然后跑weatern blot就行了是吧？我刚开始做，想跑一下标记蛋白，CD63，CD9 ...

嗯嗯