外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 外泌体提取蛋白做western检测标记物 [打印本页]
作者: 小孔加油    时间: 2016-6-22 20:28
标题: 外泌体提取蛋白做western检测标记物
  各位同行，在采用超速离心发提取外泌体后，提取蛋白，western测CD63和CD9，最后结果没有跑出条带，考虑是不是浓度太低的缘故，可看文献中报道的结果都很好。请问各位有没有遇到这种情况，是如何解决的。非常感谢！

作者: 小孔加油    时间: 2016-6-25 09:24
谢谢解答！
作者: 小孔加油    时间: 2016-6-25 09:27
Johnny 发表于 2016-6-24 17:24
超离得到exosome pellet可用裂解液或直接loading buffer煮了跑WB

请问一般加多少裂解液或者loading buffer?
作者: 五月灼蓁    时间: 2017-5-19 19:01
Johnny 发表于 2016-6-24 17:24
超离得到exosome pellet可用裂解液或直接loading buffer煮了跑WB

你好，想请问一个问题，我看到网站里有人说要用非还原性的loading buffer,那配裂解液的时后是不是不加DTT就可以了
作者: 18940258208    时间: 2017-5-30 16:55
Johnny 发表于 2016-6-26 12:08
这 看你外泌体量多少啊   少加点儿  100微升试试呗

你好，我想求助！关于exosome蛋白的western blot，我做的是CD63的鉴定，用的是Qiagen厂家的exoEasy Maxi kit试剂盒提取的细胞上清15ml的外泌体（共6个不同时间点的样本），最后溶于500ul XE buffer。前后一共做了6次WB，起初是没有用裂解液，配的10%胶，直接取20ul加相应的loading buffer，100度变性后上样，然后出来的条带是连续一条直线，之后改了各种试剂及条件，仍是一条线，我怕是自己的技术问题，同时期同条件下还跑了以前剩余的普通蛋白标本，杂的是GAPDH，跑出来的泳道间隔都没问题，证实我的技术还行。于是在最后一次加了裂解液（MPER+PMSF）后，显影竟然是白板，Oh MY GOD，我想死的心都有了。也翻阅了好多文献，但是都不是说的很具体详细
作者: Marvel    时间: 2017-6-2 20:13
不是说并非所有的外泌体都高表达CD9，CD63，CD81，只要其中一个或两个高表达就好了吗？我做的细胞，它的外泌体也就只有CD9高表达，CD81和TSG101表达量跟细胞裂解液差不多，而且没有beta-actin，GAPDH和HSP90.应该是不一样的外泌体不一样的marker。
作者: meiling    时间: 2017-6-7 21:43
Johnny 发表于 2016-6-24 17:24
超离得到exosome pellet可用裂解液或直接loading buffer煮了跑WB

为什么不能用PBS重悬呢?
作者: Hanker    时间: 2017-6-8 10:16
meiling 发表于 2017-6-7 21:43
为什么不能用PBS重悬呢?

同问，我用的试剂盒要用PBS重悬
作者: 八戒在五湖    时间: 2017-6-19 11:44
Marvel 发表于 2017-6-2 20:13
不是说并非所有的外泌体都高表达CD9，CD63，CD81，只要其中一个或两个高表达就好了吗？我做的细胞，它的外 ...

想问你下你的CD9.CD63是哪家公司的啊
作者: Marvel    时间: 2017-10-8 14:13
八戒在五湖 发表于 2017-6-19 11:44
想问你下你的CD9.CD63是哪家公司的啊

CD9是CST的，CD63是abcam的。
作者: zongzhaojing    时间: 2017-12-18 11:42
Johnny 发表于 2016-6-24 17:24
超离得到exosome pellet可用裂解液或直接loading buffer煮了跑WB

请问，裂解外泌体一般需要哪种裂解液，具体怎么处理呢，求教。
作者: Jinyi    时间: 2018-1-22 18:49
Marvel 发表于 2017-6-2 20:13
不是说并非所有的外泌体都高表达CD9，CD63，CD81，只要其中一个或两个高表达就好了吗？我做的细胞，它的外 ...

你做的什么细胞的CD9  有没有蛋白氨基酸序列
作者: 1992caoyan    时间: 2018-11-8 14:21
五月灼蓁 发表于 2017-5-19 19:01
你好，想请问一个问题，我看到网站里有人说要用非还原性的loading buffer,那配裂解液的时后是不是不加DTT ...

同问，想知道需要加DTT吗，谢谢




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