外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 外泌体BCA法测蛋白浓度的时候需要裂解吗？ [打印本页]
作者: 免疫小子    时间: 2016-6-14 21:27
标题: 外泌体BCA法测蛋白浓度的时候需要裂解吗？
现在看到好多老师测外泌体蛋白浓度的时候都裂解了EXO，但是我在文献上也有看到有些研究并没有裂解外泌体，而是直接测的表面蛋白，我想问一下这到底要不要裂解啊，两种方法有什么区别吗？还有就是一般10的6次方个细胞能得到多少外泌体呀？
作者: 徐风    时间: 2016-6-15 22:13
     The authors usually obtain 0.3 to 0.5µg of exosomes per 106 dendritic cells in 24 hr (Segura et al., 2005).
    Given the lack of details in the literature, it is difficult to say today whether all cell types produce exosomes and at what level, but exosome production seems to be a rather general mechanism, and an average level of production of ∼0.1 µg/106 cells may be taken as a rough general estimate.
作者: 免疫小子    时间: 2016-7-4 10:42
徐风 发表于 2016-6-15 22:13
The authors usually obtain 0.3 to 0.5µg of exosomes per 106 dendritic cells in 24 hr (Segura e ...

非常感谢啊  知道啦
作者: 中义    时间: 2016-9-23 17:17
直接测和裂解后测都可以，我对比过一次。
作者: 五仁    时间: 2016-9-24 00:08
中义 发表于 2016-9-23 17:17
直接测和裂解后测都可以，我对比过一次。

对比效果如何？
作者: 中义    时间: 2016-9-29 12:42
五仁 发表于 2016-9-24 00:08
对比效果如何？

测试结果相近。
作者: LarryYang    时间: 2017-1-12 00:46
中义 发表于 2016-9-29 12:42
测试结果相近。

那请问下，裂解后的还要离心取上清吗，像细胞一样？还是说不用离心？
作者: exosun    时间: 2017-2-21 23:39
LarryYang 发表于 2017-1-12 00:46
那请问下，裂解后的还要离心取上清吗，像细胞一样？还是说不用离心？

不用，因为无论是kit或超离后得到的外泌体已经把较大的杂质都去除了，你小转速离心也离不出什么的。
作者: 中义    时间: 2017-3-17 00:06
LarryYang 发表于 2017-1-12 00:46
那请问下，裂解后的还要离心取上清吗，像细胞一样？还是说不用离心？

支持楼上的，不过我是按照细胞裂解后转速离心取上清的。不裂解也可以，建议不裂解
作者: zhixiarensheng    时间: 2017-4-27 20:13
中义 发表于 2017-3-17 00:06
支持楼上的，不过我是按照细胞裂解后转速离心取上清的。不裂解也可以，建议不裂解 ...

不裂解直接加上样缓冲液电泳吗 ？
作者: 18940258208    时间: 2017-5-30 17:04
可是我用的是凯杰的kit提取的exosome，没有裂解，做出来的6个泳道的标本是全部连成一条线的
作者: 18940258208    时间: 2017-5-30 18:34
学习了
作者: yxyyjs    时间: 2017-6-28 12:37
同问，还是搞不清楚到底要不要裂解
作者: Dr.zhs    时间: 2017-9-21 12:06
中义 发表于 2017-3-17 00:06
支持楼上的，不过我是按照细胞裂解后转速离心取上清的。不裂解也可以，建议不裂解 ...

请问如果裂解的话应该加多少裂解液呢，加多了裂解液那蛋白的浓度会不会很低啊？还有，请问有没有不裂解的文献啊，能否推荐一篇？谢谢
作者: 胡杨    时间: 2017-11-24 10:06
Dr.zhs 发表于 2017-9-21 12:06
请问如果裂解的话应该加多少裂解液呢，加多了裂解液那蛋白的浓度会不会很低啊？还有，请问有没有不裂解的 ...

麻烦问一下，你最后是怎么做的呢？有裂解吗？
作者: JKF    时间: 2018-1-23 21:30
zhixiarensheng 发表于 2017-4-27 20:13
不裂解直接加上样缓冲液电泳吗 ？

加缓冲液直接煮沸变性 上样
作者: DBLB    时间: 2019-10-11 19:13
中义 发表于 2016-9-23 17:17
直接测和裂解后测都可以，我对比过一次。

请问加裂解液会和BCA试剂盒反应吗。我试过自己配的RIPA和碧云天的RIPA，但是加进去之后RIPA会和BCA试剂盒底物反应。



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