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标题: 吉林长春+急求Beckman SW 41 Ti 离心管+ [打印本页]

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-15 21:04
标题: 吉林长春+急求Beckman SW 41 Ti 离心管+


本人研三，毕业实验想做外泌体。感觉试剂盒提取的外泌体杂质太多，看电镜效果不好，查文献上大腕都是用超速离心提的，也想试一下。现有Beckman Optima L-80 XP超速离心机，配套离心管为SW 41 Ti ，货号为344059或331372。Beckman公司客服说离心管是期货，两个月内到。因时间紧迫，特求贵人相助，定当重谢！

来源: 急求Beckman SW 41 Ti 离心管



hzangs 修改补充： 楼主是吉林长春的。  如需要传递 请楼主自行与楼下同学们进行交流。

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作者: hzangs    时间: 2015-9-15 21:38
我没有这个超离管，但是我目前在试用一款分外泌体的分离柱。根据文献报道，它分出的外泌体还是挺纯的，电镜图也挺好看 没有什么杂质。
如果方便，你可以把样本给我，我帮你分外泌体出来。   
请问楼主是哪个城市的？

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作者: 惜名    时间: 2015-9-16 08:11
我有328874~

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作者: 惜名    时间: 2015-9-16 08:12

hzangs 发表于 2015-9-15 21:38
我没有这个超离管，但是我目前在试用一款分外泌体的分离柱。根据文献报道，它分出的外泌体还是挺纯的，电镜 ...

qEV提的电镜图如何？

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作者: seallin    时间: 2015-9-16 10:40
我有SW32ti

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作者: hzangs    时间: 2015-9-16 10:54

惜名 发表于 2015-9-16 08:12
qEV提的电镜图如何？

qEV电镜图   你可以参考那篇paper啊    我还没有用qEV的exosome打电镜呢    毕竟我已经有上paper的图了 不急打  哈哈

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作者: hzangs    时间: 2015-9-16 10:59
敢问楼主超离分离过exosome么？  还是有难度的哦  当年我奋斗了4个月超离  才看到沉淀哦   

其实我就是想找个人   我来用柱子分离exosome 别人给打个电镜 分享张图给我

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 11:48

惜名 发表于 2015-9-16 08:11
我有328874~

这个管是多大体积啊，能用在SW41Ti 转头上吗

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 11:50

seallin 发表于 2015-9-16 10:40
我有SW32ti

不同的转头用得用不同型号的离心管吧，你这个管是多大体积的啊

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 11:53

hzangs 发表于 2015-9-16 10:59
敢问楼主超离分离过exosome么？  还是有难度的哦  当年我奋斗了4个月超离  才看到沉淀哦   

其实我就 ...

没啊，以前都是用SBI的试剂盒提的。用超离的话应该注意什么呢，我明天准备做呢，望大神指点。我这儿方便做电镜，你可以把样品邮给我

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作者: hzangs    时间: 2015-9-16 12:30

好时之梦 发表于 2015-9-16 11:53
没啊，以前都是用SBI的试剂盒提的。用超离的话应该注意什么呢，我明天准备做呢，望大神指点。我这儿方便 ...

超离分离外泌体的一个很大问题是 外泌体沉淀很少，容易漂走 还不容易看到。。。。 一不留神 吸上清的时候 可能就把外泌体吸到废液缸了  o(╯□╰)o

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作者: hzangs    时间: 2015-9-16 12:31

好时之梦 发表于 2015-9-16 11:53
没啊，以前都是用SBI的试剂盒提的。用超离的话应该注意什么呢，我明天准备做呢，望大神指点。我这儿方便 ...

能免费帮忙打个电镜么

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 13:08

hzangs 发表于 2015-9-16 12:31
能免费帮忙打个电镜么

可以，你的样品浓度得调好，可以直接上样。样品保存和邮寄怎么办

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作者: hzangs    时间: 2015-9-16 13:11

好时之梦 发表于 2015-9-16 13:08
可以，你的样品浓度得调好，可以直接上样。样品保存和邮寄怎么办

样品邮寄之类的钱我自己搞定就行

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 13:13

hzangs 发表于 2015-9-16 13:11
样品邮寄之类的钱我自己搞定就行

我明天超离，周五正好看电镜。你是哪儿的啊

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 13:16

hzangs 发表于 2015-9-16 13:11
样品邮寄之类的钱我自己搞定就行

吉林省长春市南关区自强街218号吉大二院2号楼10楼放疗科 孟祥宽 18844501822

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作者: hzangs    时间: 2015-9-16 13:28

好时之梦 发表于 2015-9-16 13:16
吉林省长春市南关区自强街218号吉大二院2号楼10楼放疗科 孟祥宽 18844501822

我是上海这边的，上海生科院。我可能需要一段时间以后才可以。现在手里的样品没有新鲜的，都是在4°放了1周的。 半个月后可以么？

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 15:35

hzangs 发表于 2015-9-16 13:28
我是上海这边的，上海生科院。我可能需要一段时间以后才可以。现在手里的样品没有新鲜的，都是在4°放了1 ...

可以。超离用PBS重悬后什么温度保存最好啊

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作者: hzangs    时间: 2015-9-16 15:44

好时之梦 发表于 2015-9-16 15:35
可以。超离用PBS重悬后什么温度保存最好啊

有些paper里说 高浓度的exosomes可以在PBS里重悬后放在4° 保存1星期左右，也有paper说可以-80长时间保存。 我们实验室的小老板曾经去一个做exosomes的大牛实验室，那边是不提倡保存的，都是现用现制备的。
我打过放在4°一星期样品的电镜，打出来也可以看到exosomes，但是很多exosomes会粘连在一起。

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 16:08

hzangs 发表于 2015-9-16 15:44
有些paper里说 高浓度的exosomes可以在PBS里重悬后放在4° 保存1星期左右，也有paper说可以-80长时间保存 ...

现用现制备指的仅仅是做电镜，还是包括提蛋白、RNA，共培养等等。

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 16:10

hzangs 发表于 2015-9-16 15:44
有些paper里说 高浓度的exosomes可以在PBS里重悬后放在4° 保存1星期左右，也有paper说可以-80长时间保存 ...

你用超离做过血清吗，据你所知，做血清要不要用PBS稀释啊

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作者: hzangs    时间: 2015-9-16 17:06

好时之梦 发表于 2015-9-16 16:10
你用超离做过血清吗，据你所知，做血清要不要用PBS稀释啊

那边实验室所有实验用的exosomes都是现用现做。我一般最多把exosomes放在4° 48小时，超过48小时的我就用了。

我只用超离制备过exosomes-free FBS ，没有稀释，直接超离过夜。没有研究过血清中的exosomes

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 17:32
超离过夜？细胞培养上清超离时需要多长时间啊，有的文献说70min，有的说2h。

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作者: hzangs    时间: 2015-9-16 17:51

好时之梦 发表于 2015-9-16 17:32
超离过夜？细胞培养上清超离时需要多长时间啊，有的文献说70min，有的说2h。 ...

去除血清中的exosomes 通常需要超离过夜。 细胞培养上清 70min即可

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作者: hzangs    时间: 2015-9-16 22:00
还需要我帮你分样品中exosomes么？

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 22:12

hzangs 发表于 2015-9-16 22:00
还需要我帮你分样品中exosomes么？

我明天做一下超离，看看电镜。有没有特别需要注意的地方，大师给指点一下呗！

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 22:14

好时之梦 发表于 2015-9-16 22:12
我明天做一下超离，看看电镜。有没有特别需要注意的地方，大师给指点一下呗！ ...

我手头只有两个离心管，希望能有个好结果。

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-16 22:16

好时之梦 发表于 2015-9-16 22:12
我明天做一下超离，看看电镜。有没有特别需要注意的地方，大师给指点一下呗！ ...

长春——上海——长春，太麻烦了，我先做个超离看看吧！

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作者: hzangs    时间: 2015-9-16 23:22

好时之梦 发表于 2015-9-16 22:16
长春——上海——长春，太麻烦了，我先做个超离看看吧！

好的。  超离的时候注意一些，exosomes贴壁不是很紧，量会比较小，大概成白色到淡黄色，注意不要在吸上清的时候给吸走了就好。别的没有什么需要注意的。  

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-17 20:52

hzangs 发表于 2015-9-16 23:22
好的。  超离的时候注意一些，exosomes贴壁不是很紧，量会比较小，大概成白色到淡黄色，注意不要在吸上清 ...

我今天把血清等倍稀释后超速离心了2h，未见明显沉淀，但是离心管底有一层模糊的东西。我怕把外泌体弃掉，留了大约100ull的溶液，用PBS重悬准备明天离心70min看看。

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作者: hzangs    时间: 2015-9-17 20:57

好时之梦 发表于 2015-9-17 20:52
我今天把血清等倍稀释后超速离心了2h，未见明显沉淀，但是离心管底有一层模糊的东西。我怕把外泌体弃掉， ...

我没有做过血清里的exosomes的超离，但是听大家说，血清里的exosomes含量挺高的。另外听我们小老板说，血清超离分exosomes确实分的不是很干净 不是很纯。
你可以试试，做生化、分子实验应该是可以的，但是打电镜可能效果不会太好。

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作者: 好时之梦    时间: 2015-9-17 22:25

hzangs 发表于 2015-9-17 20:57
我没有做过血清里的exosomes的超离，但是听大家说，血清里的exosomes含量挺高的。另外听我们小老板说，血 ...

我用KIT做的产量确实高，但是超离确实没看到明显沉淀，难道超离的时间不够？明天打电镜，看看什么样吧。

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作者: hzangs    时间: 2015-9-18 09:47

好时之梦 发表于 2015-9-17 22:25
我用KIT做的产量确实高，但是超离确实没看到明显沉淀，难道超离的时间不够？明天打电镜，看看什么样吧。 ...

KIT 产量高是因为大着非常大量的杂蛋白，真正的exosomes在沉淀里只是一小部分而已

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作者: wjy    时间: 2015-11-19 16:07

好时之梦 发表于 2015-9-16 11:53
没啊，以前都是用SBI的试剂盒提的。用超离的话应该注意什么呢，我明天准备做呢，望大神指点。我这儿方便 ...

我也是长春，sw40ti的离心管还需要吗？我有

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作者: 10302120shao    时间: 2016-3-31 13:44

seallin 发表于 2015-9-16 10:40
我有SW32ti

亲，你还有这种型号的管子吗？你的是多大体积的？可否help下？

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作者: seallin    时间: 2016-4-12 15:36

10302120shao 发表于 2016-3-31 13:44
亲，你还有这种型号的管子吗？你的是多大体积的？可否help下？

有的有的有的有的有的，讨厌的字数限制

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