外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 又是我，外泌体小白超离血清的电镜图 [打印本页]
作者: hellzhu    时间: 2018-4-24 20:35
标题: 又是我，外泌体小白超离血清的电镜图
感谢各位战友关注，请各位帮忙看一下小白我最近做的电镜图是不是外泌体呢？感谢！
作者: hzangs    时间: 2018-4-24 22:20
可以凑合用了。    背景杂蛋白太多了
作者: hellzhu    时间: 2018-4-24 22:29
hzangs 发表于 2018-4-24 22:20
可以凑合用了。    背景杂蛋白太多了

感谢大神回复，我这次是用超离的方法的。请问有什么办法可以进一步去掉杂蛋白呢？？谢谢
作者: hzangs    时间: 2018-4-24 22:32
hellzhu 发表于 2018-4-24 22:29
感谢大神回复，我这次是用超离的方法的。请问有什么办法可以进一步去掉杂蛋白呢？？谢谢 ...

加蔗糖垫……
作者: hzangs    时间: 2018-4-24 22:32
hellzhu 发表于 2018-4-24 22:29
感谢大神回复，我这次是用超离的方法的。请问有什么办法可以进一步去掉杂蛋白呢？？谢谢 ...

加蔗糖垫……
作者: songzizhu    时间: 2018-4-24 22:37
请问楼主，超离之后送电镜之前，样品怎么处理的呢？用的什么buffer，还是需要fix。我的做出来都是怪怪的。
作者: hellzhu    时间: 2018-4-24 22:37
hzangs 发表于 2018-4-24 22:32
加蔗糖垫……

我们单位暂时没条件做这个
作者: hellzhu    时间: 2018-4-24 22:40
songzizhu 发表于 2018-4-24 22:37
请问楼主，超离之后送电镜之前，样品怎么处理的呢？用的什么buffer，还是需要fix。我的做出来都是怪怪的。 ...

你好，感谢回复。我是用PBS重悬的，然后4度冰箱保存，在两天内送去做电镜的。
作者: songzizhu    时间: 2018-4-24 22:48
hzangs 发表于 2018-4-24 22:32
加蔗糖垫……

30% 的蔗糖PBS溶液，是蔗糖垫的正确用法吗？好像实在找不到文献。谢谢
作者: hzangs    时间: 2018-4-25 17:48
songzizhu 发表于 2018-4-24 22:48
30% 的蔗糖PBS溶液，是蔗糖垫的正确用法吗？好像实在找不到文献。谢谢

2006年 thery发表的protocol里有
作者: 程琳    时间: 2018-5-2 13:13
请问楼主超离血清的步骤是怎样的，我最近也在尝试从血清里提外泌体，试过1ml血清，PBS稀释2000g30min,20000g30min,120000g 80min两次，跑WB没有条带，能分享一下超离步骤吗
作者: hellzhu    时间: 2018-5-2 15:00
程琳 发表于 2018-5-2 13:13
请问楼主超离血清的步骤是怎样的，我最近也在尝试从血清里提外泌体，试过1ml血清，PBS稀释2000g30min,20000 ...

你好，感谢回复。我是按照论坛里分享的2006年的那篇protocol来做的。
http://www.exosome.com.cn/forum. ... amp;_dsign=7cdb659a
祝好
作者: 15122392869    时间: 2018-5-8 14:41
请问 收集了多少细胞上清呢？
作者: hellzhu    时间: 2018-5-9 11:43
15122392869 发表于 2018-5-8 14:41
请问 收集了多少细胞上清呢？

你好，感谢关注。我是做血清的呢
作者: gyousiyuan    时间: 2018-5-9 21:11
请问楼主血清外泌体WB用的什么阴性蛋白呢？
作者: hua2018    时间: 2019-9-16 14:15
楼主用的多少血清提取的外泌体，最后用多少PBS重悬的呢？样本送样前和运输过程中有没有-80度冻存？
作者: hellzhu    时间: 2019-9-16 14:34
hua2018 发表于 2019-9-16 14:15
楼主用的多少血清提取的外泌体，最后用多少PBS重悬的呢？样本送样前和运输过程中有没有-80度冻存？ ...

你好啊，我用的4毫升的血清提取的外泌体的。最后用的80微升左右的PBS重悬的。我们单位自己有电镜，所以做完就上机看了，没有冻存的。
作者: hua2018    时间: 2019-9-16 14:49
hellzhu 发表于 2019-9-16 14:34
你好啊，我用的4毫升的血清提取的外泌体的。最后用的80微升左右的PBS重悬的。我们单位自己有电镜，所以做 ...

好的，谢谢你
作者: changingmm    时间: 2019-9-16 15:16
请问上电镜前的染液和时间，我染的外泌体膜很清楚，但是内容物为黑色，背景干净，不知道什么原因~谢谢



欢迎光临 外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 (http://www.exosome.com.cn/) Powered by Discuz! X3.3