求助，血液外泌体miRNA的研究

木瓜31

1、循环外泌体的研究，选择血清还是血浆，需要考虑什么？
2、血液外泌体的提取，如果传统离心需要多少量血液，够做下游研究吗？如果用kit，大家觉得哪一款更好？（SBI,LIFE..101bio?）
3、研究血液miRNA的表达，用trizol法提取总RNA，还是选择miRNeasy Mini kit等更专门的kit?
4、PCR，选择什么内参？（是选择研究miRNA较常使用的U6，还是选择人血中表达较丰富的miR423-5P等）还是外参呢？
5、筛选疾病组及对照组表达量有差异的miRNA，选择芯片还是测序？
欢迎指教及交流，谢谢各位~

惜名

围观。没做过血液外泌体，坐等大神回答。

小丫头奋斗者

有看过一篇学位论文，急性心肌梗死患者外周血Exosomes与心肌酶和病变严重程度的相关性研究，做的也是血液

wanghx_85

关注，希望有经验的过来指点一二

nene

1、循环外泌体的研究，选择血清还是血浆，需要考虑什么？
两者都可。但是提取的时候一般试剂盒不同。
2、血液外泌体的提取，如果传统离心需要多少量血液，够做下游研究吗？如果用kit，大家觉得哪一款更好？（SBI,LIFE..101bio?）
离心从10mL开始即可。kit的话 200 uL起始到500 uL。SBI与Life都很好。101bio没用过
3、研究血液miRNA的表达，用trizol法提取总RNA，还是选择miRNeasy Mini kit等更专门的kit?
Trizol不行滴。。。
4、PCR，选择什么内参？（是选择研究miRNA较常使用的U6，还是选择人血中表达较丰富的miR423-5P等）还是外参呢？
外泌体的话通常U6不表达。miR423 OK. miR16。用3个以上比较好
5、筛选疾病组及对照组表达量有差异的miRNA，选择芯片还是测序？
血液exosome，看你收集的量有多大。血液直接测的越来越多了。exosome的，貌似康成给测了

木瓜31

nene 发表于 2015-6-10 14:31
1、循环外泌体的研究，选择血清还是血浆，需要考虑什么？
两者都可。但是提取的时候一般试剂盒不同。
2、血 ...

谢谢你的回复~请问你是用过SBI提取血液外泌体吗？我也试过这个产品，电镜下看到许多20+nm的小颗粒（可能是杂蛋白），Western blot鉴定时条带似乎并不特异（考虑血清IgG影响），所以就没再用了。。现在Qiagen有一款产品直接提取exosome RNA，请问你对这个产品有了解吗？

kadak007

nene 发表于 2015-6-10 14:31
1、循环外泌体的研究，选择血清还是血浆，需要考虑什么？
两者都可。但是提取的时候一般试剂盒不同。
2、血 ...

你好，请教下，”外泌体通常U6不表达“，为什么呢？很多公司提供的miRNA内参引物都是U6啊。另外，楼主也提到外参，在实际PCR中，需要内、外参同时用吗？各用几种比较好呢？
谢谢

limitzy

学习了，谢谢

nene

kadak007 发表于 2015-6-16 19:18
你好，请教下，”外泌体通常U6不表达“，为什么呢？很多公司提供的miRNA内参引物都是U6啊。另外，楼主也 ...

组织细胞样品的miRNA内参通常是U6，而外泌体通常检测不到U6,尤其是体液，例如血液exosome中，基本检测不到的。

nene

木瓜31 发表于 2015-6-15 13:13
谢谢你的回复~请问你是用过SBI提取血液外泌体吗？我也试过这个产品，电镜下看到许多20+nm的小颗粒（可能 ...

没有用过Qiagen.
我做SBI，只做到了qPCR，没有检测蛋白。。。