外泌体测不出浓度怎么办？

毛毛 · 发表于 2015-11-19 16:50:07

超速离心提取的HEK293细胞外泌体，用CD63做western检测，条带很清晰，但是用BCA试剂盒或者OD280测浓度都显示为零或负值，外泌体用RIPA（强效）裂解后再测，还是测不出来，大家有过这样的经历吗？求指点！

毛毛 · 发表于 2015-12-14 13:29:31

子非鱼发表于 2015-12-11 21:29
我看最近的一篇文献，exosome提出来直接就去测浓度了，而且做HPLC-MS貌似都是直接做的，不经过提蛋白，看 ...

我没有找到裂解exosome再测浓度的文献，exosome表面有很多膜蛋白包裹，我觉得可以直接测，贴壁细胞分泌的量比较少，可能要用灵敏度高，测定范围微量的试剂盒，血清的就比较多，普通的蛋白浓度试剂盒都可以。

毛毛 · 发表于 2015-11-24 21:59:32

感谢各位战友的热心帮助，浓度问题已解决，是由于外泌体浓度较低，超出了BCA试剂盒的检测范围，换成灵敏度更高的试剂盒就好了。希望能对遇到类似问题的战友有所帮助。

xing_dr0914 · 发表于 2018-1-9 21:40:16

同问楼主，buffer用的是还原的还是非还原的，看有的大佬说CD63需要用非还原的才行，所以不是很清楚。

子非鱼 · 发表于 2015-12-14 14:03:43

毛毛发表于 2015-12-14 13:29
我没有找到裂解exosome再测浓度的文献，exosome表面有很多膜蛋白包裹，我觉得可以直接测，贴壁细胞分泌的 ...

多谢多谢！

毛毛 · 发表于 2015-12-14 13:30:38

kasangzc 发表于 2015-11-20 16:47
还原还是非还原呢？

应该是还原的

毛毛 · 发表于 2015-12-14 13:15:35

liuhaoisboy 发表于 2015-12-13 10:38
建议楼主也能积极回答别人在你贴提问的问题。别人帮助了你，你要把这种热心传递下去。 ...

抱歉啊！最近两天没上网。

hzangs · 发表于 2015-12-13 11:40:08

毛毛发表于 2015-11-24 21:59
感谢各位战友的热心帮助，浓度问题已解决，是由于外泌体浓度较低，超出了BCA试剂盒的检测范围，换成灵敏度 ...

我们实验室用的天根的BCA kit 一般每次我会把10ul exosome溶液 load进去测

liuhaoisboy · 发表于 2015-12-13 10:38:03

建议楼主也能积极回答别人在你贴提问的问题。别人帮助了你，你要把这种热心传递下去。

子非鱼 · 发表于 2015-12-11 21:29:13

毛毛发表于 2015-11-20 13:35
做WB时候，外泌体用PBS溶解后直接加SDS-PAGE loading Buffer，100度变性5min，上样。 ...

我看最近的一篇文献，exosome提出来直接就去测浓度了，而且做HPLC-MS貌似都是直接做的，不经过提蛋白，看你这也是这么直接，难道真的可以？请问，你这个步骤有没有文献支持啊？求分享~~

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