得到的外泌体储存在-80℃后，怎么溶解

Seagull

请教各位大神，得到的外泌体储存在-80℃后，怎么溶解，求指教，谢谢!

丁倩倩

我们都是直接冰上溶解，之前听说有人也会先放-20，我觉得多少都会有些影响，最好现提现用吧

hzangs

丁倩倩 发表于 2015-11-9 18:43
我们都是直接冰上溶解，之前听说有人也会先放-20，我觉得多少都会有些影响，最好现提现用吧 ...

嗯  支持~~
我的分离的exosomes，凡是被零度以下冷冻过的，都只用来杂western，不再用于其他实验

Seagull

hzangs 发表于 2015-11-9 19:34
嗯  支持~~
我的分离的exosomes，凡是被零度以下冷冻过的，都只用来杂western，不再用于其他实验 ...

你好，我用乳腺癌细胞MM231上清提取的外泌体，梯度离心，得到的量特别的少，请问有什么方法能使得到的外泌体的量多一些呢？还有你们收集细胞上清是收集到一定量才离心一次，还是收集一次离心一次呢？

hzangs

Seagull 发表于 2015-11-10 15:40
你好，我用乳腺癌细胞MM231上清提取的外泌体，梯度离心，得到的量特别的少，请问有什么方法能使得到的外 ...

exosomes的分出来的量确实很少。  一般我们会一次培养很多细胞，然后一次一收，不会存放到一定量。
基本上 都是15cm dish 3-5盘吧

习玉峰

参考“小鼠胰岛微血管内皮细胞外泌体的提取和鉴定方法”文献     
外泌体提取 收集上述培养上清液后离心，
4 ℃，300 × g，低温离心 15 min，去除细胞及大细胞碎
片; 4 ℃，1 200 × g， 低温离心 20 min， 去除小细胞碎
片; 4 ℃， 10 000 × g， 低温离心30 min，取上清液， 小
心移至含 Tris /蔗糖/D20( 30 g 无酶蔗糖，2． 4 g Tris
碱溶于 50 mL D20 中， 调至 pH 7． 4， 过滤除菌备用)
超速离心管中，4 ℃ ，100 000 × g， 离心 2 h，收集缓冲
垫; 预冷 PBS 混悬稀释后，4 ℃ ，100 000 × g离心2 h，
收集 黄 白 色 沉 淀 外 泌 体; PBS 重 悬 外 泌 体 后，
0． 22 μm滤膜过滤除菌， － 80 ℃ 保存备用; 待用时，
BCA 法定量外泌体的总蛋白。
大约 2 × 107 个 MS-1 细胞可提取( 200 ± 40) μg 外
泌体( 按 BCA 蛋白定量法计量)