PKH67标记与追踪protocol

AI15777126378

你的提取方法有比较大的问题  可能提出来的纯度可能不够

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exosome的试剂盒抽提
1、10厘米皿细胞2.5x107，细胞贴壁后，更换培基，培养48h.
2、收集细胞上清液，4℃下2000g*20分钟（去除细胞及碎片）.
3、把上清液加入ultra15(3kd)中，4℃下5000g*30分钟，观察余液体积为1ml左右。余液体积过多可再离心3~5min（定角装子，加满12ml，如果不满12ml，可用PBS补齐，相应的离心时间要缩短）。
4、转移浓缩液至1.5ml离心管，按照5：1体积加入exoquick-tc exosome precipitation solution颠倒混匀。
5、冰箱孵育12h（放到摇床上）小时。
6、转移上清液至新离心管，1500g*30分钟，exosome在底部棕色或白色团块。如果，若得到红色团块，用PBS溶解再离心。
7、小心弃掉上清，1500g*5分钟，去除掉残余的上清。
8、所得团块就是exosome，用PBS溶解（100~ 200ul），-80℃下保存。（电镜分析的用多聚甲醛保存）