外泌体提RNA浓度很低，qPCR循环数35左右，曲线良好，但觉...

完颜云裳 · 发表于 2016-8-10 23:36:27

楼主后面加大上清量结果有改善吗？我跑的结果也是这样，关键是U6也到了30几个循环了

hzangs · 发表于 2016-7-13 14:16:09

cherry 发表于 2016-7-13 11:13
恩，我这次上清液250ml试一下，还有我用的U6为内参，逆转录试剂盒是bio-rad 的，SYBR GREEN 是赛默飞的， ...

没有用过这些，不太了解。应该还可以

cherry · 发表于 2016-7-13 11:13:33

hzangs 发表于 2016-7-11 10:52
用10-20ul 水重悬，浓度尽量保证在100ng/ul
因为浓度低所以260/280的值不是很正常，因此这个比值可以 ...

恩，我这次上清液250ml试一下，还有我用的U6为内参，逆转录试剂盒是bio-rad 的，SYBR GREEN 是赛默飞的，这些性能好么？

cherry · 发表于 2016-7-13 11:09:35

grapetian 发表于 2016-7-11 19:31
你好我想问你们是用什么提rna?我想提细胞培养上清外泌体的rna用哪个试剂盒比较好？还是直接提exosome后 ...

天根的比较好，101bio 提外泌体RNA 的产量是100μL 外泌体 RNA 产量50~100ng,远远不够，其他试剂盒我不知道，我觉得不需要试剂盒，天根比较彻底。

hzangs · 发表于 2016-7-11 20:36:24

grapetian 发表于 2016-7-11 19:31
你好我想问你们是用什么提rna?我想提细胞培养上清外泌体的rna用哪个试剂盒比较好？还是直接提exosome后 ...

我用trizol

grapetian · 发表于 2016-7-11 19:31:10

hzangs 发表于 2016-7-11 10:52
用10-20ul 水重悬，浓度尽量保证在100ng/ul
因为浓度低所以260/280的值不是很正常，因此这个比值可以 ...

你好我想问你们是用什么提rna?我想提细胞培养上清外泌体的rna用哪个试剂盒比较好？还是直接提exosome后加trizol提取？我看sbi和qiagen的都是提血清或血浆的外泌体rna

hzangs · 发表于 2016-7-11 10:52:22

用10-20ul 水重悬，浓度尽量保证在100ng/ul
因为浓度低所以260/280的值不是很正常，因此这个比值可以不做参考，Qiagen的kit抽提的RNA 这个值也在1.6附近。
一般 GAPDH的CT值可以跑到20左右甚至更低

		自动登录	找回密码
密码			立即注册

站长推荐 /1