神外勇哥哥 发表于 2016-3-23 20:24:38

关于外泌体浓度

外泌体初学者，用的英杰公司Total exosomes isolation试剂， 不过提取出来外泌体不懂如何计算浓度，下面后续鉴定需要这个，麻烦懂的大神们助一臂之力

woshiyywlly 发表于 2016-3-24 10:30:37

如果后续要使用exosome进行功能试验的话，可以用PBS重悬后，BCA法定量，或者直接RIPA裂解定量。有条件的话，还可以nanosight，直接计算粒子数

大鹏子 发表于 2016-3-28 16:16:40

woshiyywlly 发表于 2016-3-24 10:30
如果后续要使用exosome进行功能试验的话，可以用PBS重悬后，BCA法定量，或者直接RIPA裂解定量。有条件的话 ...

你好，PBS重悬后，BCA法定量，需要先加裂解液吗？？？

woshiyywlly 发表于 2016-3-29 14:39:06

大鹏子 发表于 2016-3-28 16:16
你好，PBS重悬后，BCA法定量，需要先加裂解液吗？？？

因为后续要用来进行功能试验，所以我不加裂解液

william 发表于 2017-3-30 22:44:25

不需要那么麻烦，德国Zetaview直接测浓度，一分钟自动测11个不同位置，可以看你的样品杂质多不多，而且还可以看你的PBS是不是有颗粒污染的。

五月灼蓁 发表于 2017-5-19 16:22:53

william 发表于 2017-3-30 22:44
不需要那么麻烦，德国Zetaview直接测浓度，一分钟自动测11个不同位置，可以看你的样品杂质多不多，而且还可 ...

请教一下大神，Zetaview的具体操作步骤，谢谢

五月灼蓁 发表于 2017-5-19 16:23:53

william 发表于 2017-3-30 22:44
不需要那么麻烦，德国Zetaview直接测浓度，一分钟自动测11个不同位置，可以看你的样品杂质多不多，而且还可 ...

请教一下大神Zetaview的具体操作步骤，谢谢

18940258208 发表于 2017-5-30 17:09:43

woshiyywlly 发表于 2016-3-29 14:39
因为后续要用来进行功能试验，所以我不加裂解液

你好，能帮我看看我的protocol有什么问题吗？是关于exosome蛋白的western blot，我做的是CD63的鉴定，用的是Qiagen厂家的exoEasy Maxi kit试剂盒提取的细胞上清15ml的外泌体（共6个不同时间点的样本），最后溶于500ul XE buffer。前后一共做了6次WB，起初是没有用裂解液，配的10%胶，直接取20ul加相应的loading buffer，100度变性后上样，然后出来的条带是连续一条直线，之后改了各种试剂及条件，仍是一条线，我怕是自己的技术问题，同时期同条件下还跑了以前剩余的普通蛋白标本，杂的是GAPDH，跑出来的泳道间隔都没问题，证实我的技术还行。于是在最后一次加了裂解液（MPER+PMSF）后，显影竟然是白板，Oh MY GOD，我想死的心都有了。也翻阅了好多文献，但是都不是说的很具体详细

CARD 发表于 2017-7-27 22:30:25

考马斯亮蓝法可以测定外泌体浓度吗？

yangxuyang15 发表于 2017-10-14 20:33:04

18940258208 发表于 2017-5-30 17:09
你好，能帮我看看我的protocol有什么问题吗？是关于exosome蛋白的western blot，我做的是CD63的鉴定，用 ...

wo, my god 居然有跟我一样结果的:dizzy:
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