咨询血浆外泌体浓度是否正常范围?
我用超速离心法提取血浆外泌体,取3ml人的血浆,超速离心后100ulPBS重悬,1:1加入RIPA,BCA测蛋白浓度,5ug/ul左右,不知道是否正常。谢谢解答
比较正常。 非常感谢 我用不同超离时间提出来浓度差异比较大,可以问一下你的超离时间和速度吗?谢谢 不止不行 发表于 2021-3-24 16:02
我用不同超离时间提出来浓度差异比较大,可以问一下你的超离时间和速度吗?谢谢 ...
我用的是两次110000g 70分钟
我觉得浓度差异较大是不是和最后沉淀重悬的PBS量有关?
我的离心管只有7ml,最后我会留下2mm左右液体,没敢完全吸走...... 关节科小大夫 发表于 2021-3-25 08:17
我用的是两次110000g 70分钟
我觉得浓度差异较大是不是和最后沉淀重悬的PBS量有关?
我的离心管只有7ml, ...
我每次也会残留一点点,重悬的PBS都是差不多的,但我是35ml的大管子,感觉2h离心效果不是很好,我尝试过夜离心,得到的量就会多很多,不知道你们尝试过过个离心没?你们离心的时候会不会用PBS稀释呢,不稀释的话稠度那么高不好离下来吧 您好,请教一下,血浆提取外泌体,需要特殊处理吗?可以分享下前期的处理吗? stonesli 发表于 2023-4-13 20:10
您好,请教一下,血浆提取外泌体,需要特殊处理吗?可以分享下前期的处理吗? ...
1) 用采血针和 EDTA 抗凝管抽取全血,轻柔上下颠倒混匀后室温或者
4°C 保存,并在 1 小时内进行下一步处理;
2) 4°C 条件下,使用吊桶式转头 1900 g 离心 10 min,小心吸取上清
即为血浆,最后 500 μl 左右丢弃。得到的血浆再次离心,条件为 4°
C,3000 g,15 min,小心吸出血浆,注意不要碰到底部和侧面的
沉淀物;
3) 将血浆冻存于-80°C;
提示:送样量最好 4 ml 以上(分离 4 ml 血浆约需要 8-10 ml 全血)。
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