1. 用什么裂解，取决于你的实验，RIPA能搞定就 RIPA， 不能就换。 2.如果你研究的是囊泡内蛋白，那么 蛋白酶K是可以的
hzangs 发表于 2019-12-3 09:49
1. 用什么裂解，取决于你的实验，RIPA能搞定就 RIPA， 不能就换。 2.如果你研究的是囊泡内蛋白，那么 蛋 ...
谢谢hzangs大神的回复！跟着大神学习~:handshake:loveliness:
请问大大 有没有可以查询肿瘤和正常人外泌体某个蛋白质表达量高低的数据库呀
sammyml 发表于 2019-12-3 23:21
请问大大 有没有可以查询肿瘤和正常人外泌体某个蛋白质表达量高低的数据库呀 ...
这样的数据库 目前还不完善。 RNA库相对比较完善。这几个数据库 供你参考
http://www.exorbase.org/
http://microvesicles.org/index.html
http://www.exocarta.org/
https://exrna.org/
您好，请教下SBI Exoquick TC 试剂盒提取外泌体的相关问题。
小鼠乳腺癌EMT6 cell line，正常培养48小时后换成Exo-free 的10%FBS培养基，培养48-72小时后收集上清，提取外泌体。
1 Collect cell culture medium
2 300g 5min, 2000g 20min
3 Collect the supernatant and pass through 0.22um filter membrane
4 Ultrafiltration tube 100kDa, supernatant 15ml, 4000g 30min, 4 centigrade.
6 Collect the residual liquid on the upper part, about 200ul.
7 Add the Exoquick reagent with the ratio (sample Vs reagent, 5 Vs 1), then inverting or flicking the tube.
8 Incubate overnight, about 16 hours under 4 centigrade
9 Centrifuge 10000g 30min.
10 Collect the pellet and resuspend with PBS.
通常，按网上资料显示，试剂盒提取的外泌体会产生大量沉淀，按此操作后，最终未见沉淀出现，细胞量大概5x107。想请您帮忙分析下原因，不知您是否提取过EMT6细胞系的外泌体，可能是细胞系的原因么，还是实验方案的问题，小鼠的外泌体会和人类的大小存在差别么。谢谢
liulin625 发表于 2020-1-10 12:53
您好，请教下SBI Exoquick TC 试剂盒提取外泌体的相关问题。
小鼠乳腺癌EMT6 cell line，正常培养48小时后 ...
方法和起始量问题都不大。看不出有什么问题。 请直接咨询相关试剂盒的技术支持人员。分析是否试剂盒自身存在问题。
好的，谢谢，张老师，会不会存在小鼠细胞系外泌体的大小与人的不一样的可能性？
liulin625 发表于 2020-1-14 12:28
好的，谢谢，张老师，会不会存在小鼠细胞系外泌体的大小与人的不一样的可能性？ ...
5000万小鼠细胞， 这个量对 基于聚合物沉淀 的试剂盒来说， 不少了
liulin625 发表于 2020-1-14 12:28
好的，谢谢，张老师，会不会存在小鼠细胞系外泌体的大小与人的不一样的可能性？ ...
大小上不存在那么大的差别。
hzangs老师你好，想请教下既然去年那篇文献Reassessment of Exosome Composition证明dsDNA是直接排到细胞外的，不存在于外泌体中。那没有膜的结构的颗粒是不是只能叫细胞外颗粒了，连extracellular vesicles都不算