meiling 发表于 2017-8-29 15:32:49

外泌体蛋白定量

请问大家都是用什么方法定量外泌体蛋白的？BCA法？还是考马斯亮蓝？哪种方法好一些呢？

小苗 发表于 2017-8-29 15:51:52

测浓度吧，纯的外泌体，是提不出多少蛋白的，考染需要最少10ug的蛋白，这样一下子就把蛋白用完了。或者用银染还是可以的

落叶知秋 发表于 2017-8-29 21:38:00

我用试剂盒抽的10ml全血中的外泌体，RIPA裂解液1:1裂解后，BCA测浓度，0.3-1.2ug／ul，绝大部分集中在0.8左右，应该还可以。

vvvv 发表于 2017-8-30 11:44:08

落叶知秋 发表于 2017-8-29 21:38
我用试剂盒抽的10ml全血中的外泌体，RIPA裂解液1:1裂解后，BCA测浓度，0.3-1.2ug／ul，绝大部分集中在0.8左 ...

请问你使用RIPA裂解液裂解了多久？如果提取蛋白的话外泌体提取液一定要裂解是么？

meiling 发表于 2017-9-3 14:20:45

落叶知秋 发表于 2017-8-29 21:38
我用试剂盒抽的10ml全血中的外泌体，RIPA裂解液1:1裂解后，BCA测浓度，0.3-1.2ug／ul，绝大部分集中在0.8左 ...

请问你裂解的时候加PMSF 了吗？

落叶知秋 发表于 2017-9-14 17:23:19

meiling 发表于 2017-9-3 14:20
请问你裂解的时候加PMSF 了吗？

加PMSF或者Cooktail，虽然总蛋白还算可以，但是目的蛋白量比较少。

落叶知秋 发表于 2017-9-14 17:26:11

vvvv 发表于 2017-8-30 11:44
请问你使用RIPA裂解液裂解了多久？如果提取蛋白的话外泌体提取液一定要裂解是么？
...

那就要看看你的蛋白定位在哪里了，如果是膜蛋白的话就不太需要，例如：Identification of Developmental Endothelial Locus-1 on Circulating Extracellular Vesicles as a Novel Biomarker for Early Breast Cancer Detection。如果不是膜蛋白，理论上应该要裂解的，裂解的方法有很多，我试过RIPA，也是过自己配的裂解液加超声。

peggy4598690 发表于 2017-10-17 13:41:47

本帖最后由 peggy4598690 于 2019-2-25 09:20 编辑

vvvv 发表于 2017-8-30 11:44
请问你使用RIPA裂解液裂解了多久？如果提取蛋白的话外泌体提取液一定要裂解是么？
...
我最后一步超离后直接使用RIPA+PPI去把pellet打下来,放-80度C冰箱裂解外泌体overnight,之后用13000rpm离心后取上清液

songzizhu 发表于 2018-4-24 00:38:15

很多人都用 RIPA吧

120625 发表于 2019-11-14 17:35:02

科研小白请教：外泌体蛋白如何定量检测？
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