外泌体-小膜泡大作用！ › 标志蛋白鉴定 › 外泌体wb结果

CARD 发表于 2017-8-13 20:23:09

外泌体wb结果

最近用60mL细胞上清液提取外泌体跑了一次wb，但是结果很奇怪，细胞刮取蛋白裂解后三个指标都出现了，而外泌体却一个都没有，这是什么原因？是我没提取成功，还是浓度太低，又或是其他什么原因，只能求助于大家

kao3234659 发表于 2017-8-14 05:10:19

贴一下你的外泌体分离的流程。

CARD 发表于 2017-8-14 09:09:51

kao3234659 发表于 2017-8-14 05:10
贴一下你的外泌体分离的流程。

400g 10min, 2000g 30min,10000g 30min,100000g 70min,取沉淀PBS洗涤，100000g 70min,取沉淀PBS重悬

只是睡着了 发表于 2017-8-14 09:18:34

想问下你样本超离之后有沉淀看到么？

CARD 发表于 2017-8-14 10:24:23

只是睡着了 发表于 2017-8-14 09:18
想问下你样本超离之后有沉淀看到么？

有看到一点点的沉淀

meiling 发表于 2017-8-15 08:40:24

请问你做WB的流程是什么呢？有加DTT吗

CARD 发表于 2017-8-16 09:50:15

meiling 发表于 2017-8-15 08:40
请问你做WB的流程是什么呢？有加DTT吗

没加,直接加loading了

slxiang 发表于 2017-8-23 17:23:31

CARD 发表于 2017-8-16 09:50
没加,直接加loading了

我想请教的是：你超离用的是什么型号的离心机，rotor，和离心管？60ml一起离的么？

slxiang 发表于 2017-8-23 17:24:57

CARD 发表于 2017-8-16 09:50
没加,直接加loading了

我是新手，刚开始摸索提exosome的方法~望多指教

CARD 发表于 2017-8-23 19:52:41

slxiang 发表于 2017-8-23 17:24
我是新手，刚开始摸索提exosome的方法~望多指教

贝克曼的，sw41ti

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