请教关于血浆外泌体提取的问题
求助：1、请问用血将提取外泌体的话，提取之前血浆放-80保存会对外泌体有影响吗？2、如果用超离的方法提取血浆中的外泌体应该用多少体积呢？
请各位大神赐教！不胜感激！
zzycircle 发表于 2017-9-23 20:16
请问可以发一下具体的超离步骤吗？
是否需要0.22的膜滤过一下。谢谢~
全血1000g离心10分钟，取血浆，然后1000g再离心10分钟去除血细胞。血浆用particle-free PBS稀释后离心，10000g离心30分钟去除micro-particles（也有的protocol使用0.22um滤膜去除micro-particles），上清转移至超速离心管，100000g离心2小时。沉淀（基本上看不见）用PBS重悬，NTA检测浓度和直径。 baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-17 23:21
增加起始的exosome量，如果用Trizol试剂提取，沉淀时放在-20过夜，同时加入glycogen共沉淀。RNAseq，如果 ...
谢谢前辈回答。:D那么glycogen应该加多少呢？ 1. -80保存对外泌体没有太大的影响，注意避免反复冻融
2. It depends on your purpose, a few hundred microliter is enough for WB or RT-PCR detection of microRNA baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-16 10:35
1. -80保存对外泌体没有太大的影响，注意避免反复冻融
2. It depends on your purpose, a few hundred micr ...
好的！十分感谢！:lol 基本没有什么影响，做过对比分析 想问一下血浆是加过抗凝的么，没加过抗凝的血浆可以提外泌体么 八戒在五湖 发表于 2017-3-22 08:08
想问一下血浆是加过抗凝的么，没加过抗凝的血浆可以提外泌体么
根据试剂盒的要求，血浆提外泌体前加了凝血酶素D 丫丫 发表于 2017-3-24 09:46
根据试剂盒的要求，血浆提外泌体前加了凝血酶素D
那就是没加抗凝的血浆也是可以提外泌体的？请问有什么合适的试剂盒可以推荐吗 八戒在五湖 发表于 2017-3-27 10:23
那就是没加抗凝的血浆也是可以提外泌体的？请问有什么合适的试剂盒可以推荐吗 ...
我用的是SBI的，其他的还没用过:D 提取效果怎么样呀，我的血浆没加抗凝，都凝固了，不知道能不能提 八戒在五湖 发表于 2017-4-23 09:59
提取效果怎么样呀，我的血浆没加抗凝，都凝固了，不知道能不能提
都凝固了还怎么提？我也不知道哎，没遇到过这种情况。用试剂盒提的还可以吧。