dancing 发表于 2016-10-8 12:18:36

求助，关于裂解

提取的外泌体在做wb之前要裂解吗，裂解的话用30μl裂解液够不够，裂解过程是跟细胞裂解一样，还是加了裂解液直接涡旋然后就可以冻住保存或者加loading buffer进行之后的实验啊？

土豆 发表于 2016-10-8 13:03:14

可以加裂解液，或者直接加loading buffer煮，我都试过

dancing 发表于 2016-10-8 13:49:38

土豆 发表于 2016-10-8 13:03
可以加裂解液，或者直接加loading buffer煮，我都试过

你加了多少裂解液，加完了可以直接放在-80保存吗，因为要过段时间再做wb

土豆 发表于 2016-10-8 15:22:54

dancing 发表于 2016-10-8 13:49
你加了多少裂解液，加完了可以直接放在-80保存吗，因为要过段时间再做wb

最好是用2x的裂解液，1：1去加。

baishixiaoyaozi 发表于 2016-10-8 22:00:51

离心以后弃上清液，直接加裂解液 （RIPA或者2％SDS溶液），超声一下提高裂解效率。BCA以后分装－20（短期）或－80（长期）保存。

dancing 发表于 2016-10-12 09:17:53

baishixiaoyaozi 发表于 2016-10-8 22:00
离心以后弃上清液，直接加裂解液 （RIPA或者2％SDS溶液），超声一下提高裂解效率。BCA以后分装－20（短期） ...

谢谢，一般是加多少裂解液

baishixiaoyaozi 发表于 2016-10-12 21:53:19

dancing 发表于 2016-10-12 09:17
谢谢，一般是加多少裂解液

依exosome产量而定，我用的是原代胶质细胞，100ml培养基离心之后，加100ul裂解液，蛋白总量为30－50ug之间，3－4次mini blot。

exome 发表于 2017-3-9 23:16:53

baishixiaoyaozi 发表于 2016-10-12 21:53
依exosome产量而定，我用的是原代胶质细胞，100ml培养基离心之后，加100ul裂解液，蛋白总量为30－50ug之 ...

学习了，谢谢

rcg0516 发表于 2018-7-8 17:30:43

土豆 发表于 2016-10-8 13:03
可以加裂解液，或者直接加loading buffer煮，我都试过

你好，如果重悬时候用的是PBS，然后加裂解液烈解再测蛋白浓度，那我上样时还要不要加裂解液呢？

Zhuocaili3 发表于 2019-5-14 22:08:58

想请问一下楼主后来用的什么试剂盒测的浓度呢？现在也遇到了跟楼主一样的问题
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